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一種從熱帶木本植物中無毒組織研磨提取核酸的方法

  發布時間:2019/12/19 點擊量:2855

    木本熱帶植物中含有大量復雜的有機化合物,這些有機化合物會抑制提取RNA或DNA所需的化學程序,從而不利于后續研究及應用,如RNA測序和基因表達分析。為了克服這個問題,研究人員必須使用CTAB / PVP緩沖液的提取方案,而不能使用市售的DNA / RNA提取試劑盒。但是,這種提取方式耗時長、需使用有毒化學品(例如苯酚和CHCl3),并且一次只能處理少量樣品。為了克服這些問題,我們開發了一種基于CTAB / PVP的新方法,用于RNA或DNA提取,去掉了傳統方法中的苯酚/CHCl3步驟。此外,該方法(fa)同(tong)樣適(shi)用于96孔(kong)(kong)深孔(kong)(kong)板(ban),使(shi)用SPEX高通(tong)量組織(zhi)研磨儀,一(yi)次(ci)研磨6塊深孔(kong)(kong)板(ban),同(tong)時處(chu)理576個樣品,大(da)大(da)加(jia)快了處(chu)理速度。

 

    我(wo)們(men)的(de)新(xin)方(fang)法,能夠從夏威夷果(guo)、牛油果(guo)和(he)芒果(guo)組織(zhi)中,成(cheng)(cheng)功(gong)提取(qu)RNA,這些(xie)組織(zhi)使用(yong)傳統方(fang)法很難提取(qu)到RNA。而后我(wo)們(men)還驗證(zheng)了(le),該方(fang)法提取(qu)的(de)RNA成(cheng)(cheng)功(gong)地合成(cheng)(cheng)cDNA,以進(jin)行實時(shi)定量PCR并(bing)生成(cheng)(cheng)高質量的(de)RNA-Seq庫。該方(fang)法經(jing)輕微改動后,可用(yong)于從不(bu)同(tong)的(de)熱帶和(he)亞熱帶樹(shu)種中快速提取(qu)DNA。

 

   ; 這種方法(fa)可以更安全、更快(kuai)速地從(cong)困(kun)難樣品中提取DNA和RNA,從(cong)而為將來在熱(re)帶樹木上(shang)的研究提供了(le)便利。

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